Аденовирусная инфекция телят и крс

5.14. Аденовирусная инфекция телят

Аденовирусная инфекция (англ. —Bovineadenoviraeinfection) — остро протекающая болезнь телят, характеризующая поражением органов дыхания, пищеварения, лимфоидной ткани и конъюнктивитом.

Историческая справка, распространение, степень опасности и ущерб. Болезнь регистрируется во многих странах мира. Вирус впервые был выделен в 1954 г. в США.

Возбудитель болезни. Возбудитель относится к семействуAdenoviridaeДНК-содержащих вирусов, которое включает аденовирусы человека, животных, в том числе птиц, и состоит из двух родов:Mastadenovirus(М) — аденовирусы млекопитающих иAviadenovirus(А) — аденовирусы птиц. Диаметр вириона в среднем составляет 70. 90 нм.

Род М содержит около 80 серологических типов, ассоциированных с различными хозяевами. У человека выделено 47 серотипов, у обезьян — 27, у лошадей — 4, у крупного рогатого скота — 10, у овец — 6, у свиней —

3444. 6, у собак — 2 серотипа. Установлено антигенное родство аденовирусов человека и крупного рогатого скота.

Различают антигены вируса трех видов: А, В, С. Антиген А группоспе-цифичен, антиген В — белковый компонент, токсичный фактор, антиген С типоспецифичен.

Вирус размножается в культуре ткани клеток крупного рогатого скота, вызывая цитопатогенное действие (ЦПД), которое характеризуется специфической дегенерацией клеток зараженного монослоя, начиная с периферии. Монослой разрывается, клетки разбухают, утрачивают правильную форму, затем округляются и собираются в конгломераты, похожие на гроздья винограда. Цитопатический эффект сопровождается образованием внутриядерных включений и никогда не приводит к полному разрушению клеток, характерному для ряда других цитопатогенных вирусов.

Аденовирусы весьма устойчивы. Десятикратное замораживание и оттаивание возбудителя не снижают его инфекционности. Прогревание в течение 30. 60 мин при температуре 50, 56 и 60 °С не инактивирует аденовирус, но некоторые серотипы утрачивали инфекционность. Аденовирусы устойчивы к рН от 3,0 до 9,0 в течение 3 ч, ультрафиолетовым лучам — в течение 30. 60 мин; при температуре от —30 ° до 4 “С — не более 6 мес; 20.„22 °С — 1. 4 мес; 36 “С — 15. 60 дней. В 2%-ном растворе гидроксида натрия или калия аденовирус погибает в течение нескольких минут.

Эпизоотология. Источник возбудителя инфекции — больные и переболевшие животные, выделяющие вирус с истечениями из носа и фекалиями. Вирус изолируют от 50. 80 % больных телят из проб конъюнктивы, носовой полости, миндалин, фекалий.

Факторы передачи возбудителя — корма, вода, подстилка, предметы ухода, загрязненные выделениями больных животных. Заражение происходит воздушно-капельным и алиментарным путями, а также через конъюнктиву. Заболеваемость телят составляет 50. 80%, летальность — 15. 60%. Болезнь широко распространена в районах интенсивного животноводства. Наблюдается латентное вирусоносительство, которое подтверждается выделением вируса из ткани почек, тестикул и крови здоровых животных.

Чаще болеют телята от 2-недельного до 4-месячного возраста. Болезнь регистрируется в зимне-весенние месяцы при комплектовании хозяйств. Персистентное носительство и нестерильность иммунитета обусловливают стационарность инфекции.

Аденовирусная инфекция чаще проявляется небольшими вспышками, поражая отдельные группы животных, быстро распространяется на все стадо. У взрослых животных (10. 100 %) установлено носительство гуморальных антител в высоких титрах.

Патогенез. В организме аденовирус первично локализуется в органах респираторного тракта, размножается в лимфоидных органах, затем проникает в кровь, легкие, органы пищеварения, центральную нервную систему и поражает их. Вирусные респираторные болезни телят сопровождаются иммунодефицитными состояниями.

Течение и клиническое проявление. Инкубационный период болезни 4. 7 дней. Течение болезни зависит от условий содержания животных. Сначала появляются слезотечение и слизистые носовые истечения, которые переходят в течение 3. 5 дней в гнойные. У телят снижается аппетит, учащаются пульс и дыхание, появляются депрессия, сухой кашель.

Со 2. 3-х суток заболевания у телят развиваются тимпания и диарея. На 3. 4-Й день повышается температура тела до 41,5 “С и удерживается до

3456. 9 дней. Диарея длится несколько дней. Фекальные массы жидкие, серо-коричневого цвета, с примесью кусочков слизистой оболочки, иногда с кровью. Возможны колики. Летальность составляет 40. 60 %.

Больное животное выздоравливает, если аденовирусная инфекция не осложнена пастереллами, микоплазмами или другими возбудителями. У телят до 10-дневного возраста при наличии колострального иммунитета болезнь не проявляется, однако они могут быть инфицированными.

У отдельных телят, переболевших при остром течении, через 1. 2 нед может развиться гнойная бронхопневмония, сопровождающаяся глубоким влажным кашлем, выраженной инспираторной одышкой, гнойными истечениями из носовой полости.

Патологоанатомические признаки. Отмечают гастроэнтерит катарально-геморрагического типа, увеличение печени, изменения в органах дыхания (ателектаз, уплотнение, эмфизема, пневмония), дегенерацию лимфатической системы (лимфатические узлы увеличены, отечны, анемичны).

При гистологическом исследовании в эндотелиальных клетках сосудов селезенки, печени, почек, слизистой оболочки желудка и кишечника, лимфатических узлов и сердца обнаруживают внутриядерные включения.

Диагностика и дифференциальная диагностика. Диагноз устанавливают комплексно с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований.

Лабораторная диагностика включает: 1) обнаружение антигена в патологическом материале (мазках-отпечатках, срезах) в реакциях иммуно-флюоресценции (РИФ) и связывания комплемента (РСК); 2) выделение возбудителя в культуре ткани и его групповую идентификацию в РСК, РИФ, реакции диффузной преципитации (РДП); 3) выявление антител в сыворотке крови больных и переболевших животных (ретроспективная диагностика) в РСК, РДП, ELISA, реакциях непрямой гемагглютинации (РИГА), торможения гемагглютинации (РТГА).

Если в РИГА и РСК выявлено 4-кратное и более повышение титра антител в парных сыворотках крови, то ставится точный диагноз на аденовирусную инфекцию. Биологическая промышленность выпускает набор для диагностики аденовирусной инфекции крупного рогатого скота.

При дифференциальной диагностике необходимо исключить парагрипп-3, респираторно-синцитиальную инфекцию, инфекционный ринотрахеит, вирусную диарею, коронавирусную и парвови-русную инфекции, микоплазмоз, хламидиоз, пастереллез, сальмонеллез.

Иммунитет, специфическая профилактика. У переболевших животных иммунитет сохраняется до 5 мес. Иммунные животные остаются вирусо-носителями, при различных стрессовых воздействиях или обработке гормональными препаратами они становятся источником возбудителя аденовирусной инфекции и могут заболеть повторно смешанной респиратор-но-кишечной инфекцией.

Для активной иммунизации молодняка и стельных коров применяют инактивированную и живую бивалентную вакцину против аденовирусной инфекции и парагриппа, а также другие ассоциированные вакцины, содержащие антигены инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, реови-русной и хламидийной инфекций крупного рогатого скота. Разрабатывается технология получения рекомбинантных вакцин с использованием реплицирующихся и нереплицирующихся аденовирусов.

Лечение. Для специфического лечения применяют гипериммунные сыворотки, в том числе поливалентную сыворотку против парагриппа, ин-

346фекционного ринотрахеита, аденовирусной инфекции и хламидиоза крупного рогатого скота. Эффективно применение крови реконвалесцен-тов с профилактической и лечебной целью.

Положительный лечебный эффект оказывают иммуноферон — комбинированный препарат экзогенного интерферона, индуцированный растительным интерфероногеном; лигаверин — комплекс биополимеров, выделенных из природного растительного сырья. Применение иммуномодули-рующего препарата изокватерина с иммунной сывороткой животных-доноров способствует восстановлению нарушенных звеньев в иммунном статусе телят при респираторных болезнях.

Положительные результаты получены при применении аэрозолей: йодтриэтиленгликоля, смеси ихтиола, дегтя, скипидара и сульфаниламидных препаратов и других средств.

Для профилактики смешанных инфекций целесообразно применять антибиотики и сульфаниламидные препараты.

Профилактика и меры борьбы. В основе профилактики болезни лежит соблюдение системы ветеринарно-санитарных мероприятий. С целью повышения устойчивости рекомендуется облучать телят ультрафиолетовыми лучами в течение 7. 10 дней.

Комплектование групп телят в комплексах проводят с учетом их возраста и живой массы из заведомо благополучных хозяйств. Заполнение секционного профилактория необходимо вести в течение 2. 3 дней по принципу «все свободно — все занято». Перед комплектованием групп поголовье исследуют серологически с целью определения иммунологической структуры стада. Животных при транспортировке и постановке в карантинное отделение обрабатывают антистрессовыми и общеукрепляющими препаратами. Проводят плановые серологические исследования 5. 10% телят 1. 2 раза в год на респираторные инфекции.

Эффективна аэрозольная дезинфекция помещений в присутствии животных с применением молочной кислоты, хлорскипидара, резорцина, пероксида водорода, этония, йодтриэтиленгликоля, скипидара и других препаратов в известных концентрациях. В отсутствие животных для дезинфекции помещений используют горячий раствор гидроксида натрия, йодез, хлорид йода, виркон С, раствор формалина.

Для специфической профилактики и лечения применяют кровь рекон-валесцентов и поливалентную сыворотку против парагриппа, инфекционного ринотрахеита, аденовирусной инфекции и хламидиоза крупного рогатого скота. В первую очередь при вспышке аденовироза сывороткой в лечебных дозах (2 мл) обрабатывают условно больных (подозреваемых в заболевании) телят.

Контрольные вопросы и задания. 1. Каковы эпизоотологические особенности болезни? 2. На основании каких данных можно поставить диагноз на аденовирусную инфекцию телят? 3. От каких болезней необходимо дифференцировать данную болезнь? 4. Какие средства можно применять для лечения больных животных? 5. Охарактеризуйте мероприятия по профилактике и ликвидации болезни.

Аденовирусы крупного рогатого скота

Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота (аденоинфекция) — остропротекающая болезнь, преимущественно телят. Характеризуется поражением органов дыхания, пищеварения и конъюнктивитами. У взрослых животных протекает обычно латентно.

Болезнь широко распространена во многих странах мира, в том числе и в России. Чаще болеют телята от 2-недельного до 4-месячного возраста. Более взрослые животные поражаются реже.

Характеристика возбудителя. Впервые вирус изолировал Клейн в 1939г. (США).

Вирус относится к семейству Adenoviridae, роду Mastadenovirus. Вирионы вируса представляют собой лишенный суперкапсидной оболочки двадцатигранник кубической симметрии диаметром 70—90 нм. Каждый вирион состоит из 252 капсомеров, из которых 240 являются гексонами (капсомер в окружении шести капсомеров), 12 — пентонами (капсомер в окружении пяти капсомеров) и длинного отростка с утолщением на вершине. Геном аденовирусов содержит одну линейную молекулу двуспиральной ДНК.

Устойчивость к физико-химическим воздействиям. Вирусы во внешней среде (в пределах pH 5,0—9,0) более устойчивы, чем другие вирусы: при 4 °С сохраняют активность в течение 90 дней; при 24 °С — 1—3 мес; при 36 °С — 15—60 дней; при 50 °С — инактивируются за 30—60 мин. Устойчивы к эфиру, хлороформу, трипсину, повторному замораживанию и оттаиванию, длительно сохраняются в лиофилизированном состоянии (более 5 лет). Абсолютный этиловый спирт и формалин в конечной концентрации 0,1—0,3 % инактивируют вирусы. УФ-лучи полностью инактивируют их за 30—60 мин.

Антигенная структура. У аденовирусов различают антигены трех видов: А, В и С.

Антиген А (связан с гексонами) — группоспецифичен, при иммунизации стимулирует образование группоспецифических комплементсвязывающих, преципитирующих антител, антител, реагирующих в реакции РНГА, а также вируснейтрализующих антител против гомологичного вируса.

Антиген В (связан с пентонами) — токсический фактор, ответственный за ранний цитопатический эффект.

Антиген С (связан с нитевидными структурами вирусного капсида) — типоспецифичен, он стимулирует выработку только типоспецифических антител, выявляемых в pH и РТГА.

В культуре клеток, инфицированной онкогенными вирусами, выявляют Т (трансплантационный) антиген. Вирусы первой подгруппы содержат в геноме родоспецифическую детерминанту, общую для вирусов млекопитающих.

Антигенная вариабельность. У крупного рогатого скота установлено 10 серотипов аденовирусов. Все 10 типов аденовирусов крупного рогатого скота на основании общих комплементсвязывающего и преципитирующего антигенов, выявляемых в РСК, РДП и РИФ, делят на две подгруппы. К первой подгруппе относят серотипы 1, 2 и 3, остальные типы — ко второй подгруппе. Вирусы первой подгруппы по антигенным и биологическим свойствам ближе к аденовирусам человека.

Антигенная активность. Вирус индуцирует в организме животных образование вируснейтрализующих, комплементсвязывающих и преципитирующих антител.

Культивирование вирусов. Для культивирования аденовирусов крупного рогатого скота используют культуры клеток из тканей этих животных: почки эмбриона коровы (ПЭК), тестикулы бычка (ТБ), легкие эмбриона коровы (ЛЭК). Вирусы вызывают в клетках характерный цитопатический эффект (округление клеток и образование из них гроздевидных скоплений).

Аденовирусы крупного рогатого скота не размножаются в куриных эмбрионах и непатогенны для лабораторных животных, кроме некоторых онкогенных штаммов (3 серотипа), которые вызывают опухоли у новорожденных хомячков.

Вирусы первой подгруппы хорошо репродуцируются в культуре клеток ПЭК, ЛЭК и ТБ с образованием в них одного ядерного включения неправильной округлой формы.

Для вирусов второй подгруппы используют культуру клеток ТБ или ЛЭК, в которых они продуцируют множественные внутриядерные включения правильной округлой формы.

В последние годы для культивирования аденовирусов первой и второй подгрупп предложена перевиваемая культура клеток почки теленка Т-1 (Таурус-1).

Гемагглютинирующие свойства. Гемагглютинирующая активность установлена у аденовирусов первой подгруппы в отношении эритроцитов белых крыс и в низких титрах — эритроцитов белых мышей. Некоторые штаммы вирусов второй подгруппы приобретали гемагглютинирующие свойства после предварительной их концентрации. Более четкие результаты РТА получают при температуре 4 °С. Спектр гемагглютинирующей активности многих штаммов аденовирусов еще не изучен.

Гемадсорбирукнцие свойства. Не установлены.

Онкогенные свойства. Обнаружены у штамма WBR-1 для новорожденных хомячков.

Экспериментальная инфекция. Воспроизводится только на телятах 15—30-дневного возраста, лучше на безмолозивных. У животных старшего возраста болезнь протекает хронически.

Клинические признаки. Инкубационный период болезни длится 4—7 дней. Течение болезни зависит от условий кормления, содержания, возраста телят. Наиболее остро она протекает у молодняка 5—20-дневного возраста, сопровождается подъемом температуры тела до 41,5 °С, слезотечением, слизистыми, затем слизисто-гнойными истечениями, кашлем, затрудненным дыханием. У телят наблюдают слабость, понос, иногда с примесью крови в фекалиях. Смертность может достигать 60 %. У животных старшего возраста болезнь часто приобретает хроническое течение. Переболевшие телята отстают в росте и долго кашляют. Таким образом, для аденовирусной инфекции характерно преобладание респираторного, конъюнктивального или кишечного синдрома.

Патологоанатомические изменения. При вскрытии обнаруживают признаки катарально-геморрагического гастроэнтерита, изменения в органах дыхания (очаговые уплотнения, ателектаз и эмфизему легких). Регионарные лимфатические узлы увеличены. В клетках легочной ткани, слизистых оболочек трахеи, бронхов, кишечника и паренхиматозных органов находят внутриядерные включения.

Локализация вируса. От клинически больных животных аденовирусы изолируют из проб с конъюнктивы, носовой полости, миндалин, из крови и фекалий, а также из паренхиматозных органов и лимфатических узлов погибших телят. Переболевшие животные длительное время остаются вирусоносителями. Характерное биологическое свойство аденовирусов — тропизм к лимфоидной ткани.

Источники инфекции. Основной источник аденовирусной инфекции — больные животные, которые выделяют вирус в окружающую среду с истечениями из носа и фекалиями, а также вирусоносители. Заражение происходит воздушно-капельным, алиментарным путем и через конъюнктиву. Передача инфекции возможна через корма, подстилку, загрязненные выделениями больных животных.

Диагностика. Диагноз ставят, основываясь на анализе эпизоотологических, клинических данных, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований. При этом решающее значение имеют лабораторные исследования, так как сходную патологию могут вызвать вирусы ПГ-3, инфекционного ринотрахеита, диареи, респираторно-синтициальной инфекции, а также хламидии и другие агенты. Поэтому поступивший материал исследуют в лаборатории параллельно на все вышеуказанные инфекции, используя диагностические наборы, выпускаемые биологической промышленностью.

Взятие и подготовка материала. В лабораторию отправляют паралогический материал от больных животных, взятый в первые со дня болезни при выраженной клинической картине или от животных, убитых с диагностической целью в острой стадии заболевания.

От больных животных берут смывы со слизистых оболочек носа, глаз и прямой кишки с помощью стерильного ватно-марлевого или поролонового тампона; кровь в первые 3 дня заболевании (не менее чем от 10 животных) и через 3 нед от тех же животных (дли получения парных сывороток).

От животных, убитых с диагностической целью, берут кусочки легких, селезенки, слизистые оболочки носовой полости, трахеи, кишечника, регионарные лимфатические узлы.

Кусочки органов массой до 20 г помещают в стерильную посуду (пробирки или пенициллиновые флаконы с резиновыми пробками); ватно-марлевые тампоны (смывы) — во флаконы с раствором Хенкса или физиологическим раствором. Материал в термосе с охлаждающей смесью и сопроводительное письмо доставляют в лабоораторию с нарочным.

В лаборатории флаконы с тампонами встряхивают 2—3 мин, отжимают и удаляют, а содержимое флаконов центрифугируют. Надосадочную жидкость используют для выделения вируса, из осадка клеток делают мазки для РИФ.

Из кусочков органов убитого животного готовят мазки-отпечатки для РИФ и 10%-ную суспензию вируса для его выделения.

Лабораторная диагностика. Индикация вируса. В патологичсском материале ее проводят путем обнаружения вирусного антигена в серологических реакциях: РИФ, ИФА, РСК, РДП. Для этой цели в РИФ используют флуоресцирующие антитела (из диагностических наборов) к вирусам ПГ-3, ВД, ИРТ, PC, аденовирусам первой и второй подгрупп. Кроме того, для индикации аденовирусов иногда проводят обнаружение в мазках-отпечатках внутриядерных телец-включений, выявление которых имеет ориентированный характер.

Для обнаружения вирусной нуклеиновой кислоты в смывах и фекалиях используют ДНК-зонд, разрабатывают ПЦР.

Изоляция вируса. Выделение вирусов проводят в первично-трипсинизированных культурах клеток эмбрионов крупного рогатого скота (почки, легкие) и тестикул бычка. В последние годы чаще используют перевиваемые линии клеток (почки, легкие), довольно успешно выделяют вирусы на перевиваемой культуре клеток почки теленка (Т-1), а вирус диареи — на эпителии коронарных сосудов теленка (КСТ). Зараженные и контрольные культуры клеток инкубируют при 37 — 38°С до 7—14 дней, ежедневно просматривая под микроскопом для выявления цитопатического действия. Специфические изменения в клетках, зараженных аденовирусами, начинаются с периферии монослоя, который разрывается, клетки округляются и собираются в конгломераты, похожие на грозди винограда. Цитопатический эффект сопровождается образованием внутриядерных включений.

Изолят считают выделенным, если он вызывает стабильное, однотипичное ЦПД не менее чем в трех последовательных пассажах. В этом случае возможно его последовательное идентифицирование. При отсутствии ЦПД в трех пассажах проводят четвертый пассаж с попыткой выявления вируса в монослойной культуре клеток на покровных стеклышках методом РИФ. При отрицательной реакции выделение вирусов прекращают.

Выделение вирусов на естественно-восприимчивых лабораторных животных и на куриных эмбрионах не применяют.

Идентификация выделенного вируса. Ее проводят в серологических реакциях: РИФ, РСК, РДП, PH, РТГА. Чаще всего используют РИФ с двумя флуоресцирующими сыворотками, соответствующими двум подгруппам (первой и второй). Типирование аденовирусов осуществляют в научно-исследовательских учреждениях, имеющих типоспецифические сыворотки и вирусы 10 типов аденовирусов. Для этой цели используют PH, а если выделенный вирус обладает гемагглютинирующей активностью, ставят РТГА по общепринятым методам.

Ретроспективная диагностика. Ее проводят с целью обнаружения специфических антител в сыворотке крови переболевших животных в РНГА, ИФА, непрямой РИФ. РСК и РДП, используя парные сыворотки крови, взятые в первые 2—3 сут болезни и через 2—4 нед. Диагностическое значение имеют обнаружение 4-кратного и большего нарастания титра антител во второй сыворотке переболевшего животного и увеличение ееропозитивных проб.

Дифференциальная диагностика. На основании эпизоотологических, клинических данных и патологоанатомических изменений точный диагноз на аденовирусную инфекцию поставить трудно из-за сходства ее с парагриипом-3, вирусной диареей, инфекционным ринотрахеитом, респираторно-синтициальной инфекцией, хламидиозом и другими заболеваниями, поражающими респираторно-кишечный тракт животных. Кроме того, аденовирусная инфекция очень часто протекает в ассоциации с вышеназванными заболеваниями. Поэтому только лабораторные исследования, проводимые с использованием диагностических наборов к указанным болезням, помогут правильно поставить диагноз.

Иммунитет и специфическая профилактика. Вопросы иммунитета при аденовирусной инфекции изучены недостаточно. Это, очевидно, связано с множеством типов возбудителя и латентным течением самой инфекции у взрослых животных. Установлено, что переболевшие и вакцинированные телята приобретают иммунитет к заражению вирусом гомологического типа и вирусам, относящимся к аналогичной антигенной подгруппе. Пассивный иммунитет создают антитела молозива в пределах 2—2,5 мес. Высокой эффективностью обладают секреторные антитела слизистой оболочки респираторного тракта.

В нашей стране применяют инактивированную димерэтиленаэросил вакцину из штаммов двух подгрупп аденовирусов крупного рогатого скота, а также бивалентную вакцину, содержащую аденовирусы двух подгрупп и возбудитель пастереллеза. У вакцинированных коров титр антител в крови на достаточно высоком гриппе сохранялся в течение 6 мес после отела, у вакцинированных телят — более 4,5 мес.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Аденовирусная инфекция телят и крс

[Bovine Adenoviral Infections (англ.); Adenovirusbedingte Respiratorisch-enterale Erkrankung des Kaibes, Pneumo-Enteritis (нем.)]

Аденовирусная инфекция КРС (АВИ КРС, аденовирусная пневмония телят, аденовирусный пневмоэнтерит) у телят протекает остро и характеризуется поражением органов дыхания, пищеварения и конъюнктивитами. КРС часто является носителем латентных аденовирусов (АВ) КРС, вызывающих бессимптомные инфекции, патогенез и роль которых в общей патологии животных остается неясной. АВИ КРС регистрируется во многих странах мира.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Болезнь характеризуется поражением органов дыхания, пищеварения (пневмонии, энтериты и пневмоэнтериты) и реже глаз. Чаще болеют телята в возрасте от 2 недель до 4 месяцев. Инкубационный период длится 4—7 дней. Болезнь проявляется повышением температуры тела до 41,5 °С, слезотечением, серозным истечением из носа, кашлем, затрудненным дыханием, тимпанней, коликами, диареей. Истечения из глаз и носа слизистые, а затем слизисто-гнойные или гнойные.

В период острой инфекции у больных снижается аппетит, а некоторые животные отказываются от корма. Течение болезни зависит от условий содержания, кормления и возраста телят. Наиболее остро она протекает у молодняка 15—20-дневного возраста. При этом наблюдают общую слабость и понос (фекалии с примесью крови и кусочков слизистой оболочки кишечника). Телята гибнут через 1—3 дня после появления первых симптомов болезни. Среди телят раннего возраста смертность достигает 60 %, у телят до 10-дневного возраста, получивших с молозивом матери AT, болезнь клинически не проявляется. Однако они могут инфицироваться, даже если содержат ВНА молозивного происхождения. В течение острой эпизоотии АВ КРС изолируют от 50—80 % животных из проб конъюнктивы, носовой полости, миндалин, фекалий. Их также выделяют от телят 1—4-недельного возраста с симптомами пневмонии и энтерита. У животных старшего возраста болезнь часто приобретает хроническое течение. Переболевшие телята внешне кажутся здоровыми, но отстают в росте, развитии и долго кашляют.

При вскрытии обнаруживают признаки геморрагического катарального гастроэнтерита, расстройства циркуляции крови, изменения органов дыхания (уплотнение, ателектаз и эмфизему легких). При гистологическом исследовании находят гиперплазию и слущивание бронхиального эпителия; закупорку бронхов некротическими массами; в легких вокруг мелких кровеносных сосудов видно скопление лейкоцитов; в клетках легочной ткани, слизистой оболочки трахеи и бронхов, эндотелиальных клетках тонких сосудов, в клетках лимфоузлов, почек, дечени, селезенки, сердца, слизистой оболочки желудка и кишечника — внутриядерные включения.

АВ КРС различаются по ряду свойств, в т. ч. и по морфологии включений, что послужило основанием для разделения их на 2 подгруппы. В клетках, инфицированных вирусами 1-й подгруппы (типы 1, 2 и 3), выявляют полиморфные базофильные образования (мелкозернистые, гранулярные), превращающиеся водно грубое ядерное ба-зофильное включение. Вирусы 2-й подгруппы (типы 4, 5, 6, 7 и индуцируют образование множественных эозинофильных включений правильной округлой формы, которые увеличиваются в объеме, количество их снижается до 1 —3. Только некоторые из них на поздних стадиях становятся слабо базофильными. На 5-е сутки после заражения многие из инфицированных клеток дегенерируют, но даже в таких клетках включения часто сохраняются. При флуорохромировании акридином оранжевым включения флуоресцируют слабо, но они более четко видны как округлые светло-зеленые образования. Подтверждено четкое морфологическое различие включений, образующихся при репродукции 1-й и 2-й подгрупп АВ КРС. Метод отличается большой чувствительностью, простотой и быстротой приготовления препаратов.

Устойчивость. АВ КРС устойчивы к физико-химическим воздействиям, трипсину, эфиру, хлороформу, сапонину, дезоксихолату натрия и 50 %-ному этиловому спирту. Инактивируют вирус абсолютный этиловый спирт и формальдегид в конечной концентрации 0,1—0,3 %. Обработка хлороформом повышает его инфекционный титр на 0,5 lg. АВ инактивируются при температуре 56 °С за 30—60 мин. Прогревание при 56 °С приводило к полной инактивации эталонного шт. Fukuroi через 30 мин, а изолятов — через 2 ч. В условиях 70 °С шт. Fukuroi полностью инактивировался через 10 мин, а полевые изоляты — через 30 мин. При 4 °С все изучаемые вирусы сохраняли инфекционную активность в течение 90 дней. При 24 °С в течение 2 месяцев титр вируса постепенно снижался на 1 lg. Таким образом, при 56 и 70 °С была установлена большая терморезистентность свежевыделенных изолятов по сравнению с эталонным штаммом. Эти данные учитывают при изучении кинетики инактивации вирусов и условий хранения вируссодержащего сырья в технологическом процессе изготовления. АВ КРС устойчивы к изменению рН среды (3—9) в течение 3 ч при комнатной температуре, полностью инактивируются УФ лучами за 30—60 мин. Они длительно хранятся при -30 °С, при 4 °С — более 6 месяцев, при комнатной температуре — 1—4 месяца и при 36 °С — 15—60 дней; устойчивы к повторному замораживанию и оттаиванию, хорошо сохраняются при рН 6—9 и переносят сушку.

АГ структура. При репродукции АВ, помимо зрелых форм в клетках образуются неинфекционные растворимые АГ, которые накапливаются в больших концентрациях при относительно малом содержании инфекционного вируса. Различают АГ 3 видов: А, В, С. АГ А группоспецифичен, при иммунизации он стимулирует образование группоспецифических КСА, ПА и AT, реагирующих в РИГА. Кроме того, стимулирует образование ВНА против гомологичного вируса. АГ В — белковый компонент, токсичный фактор, ответственен за ранний ЦПЭ. АГ С типоспецифичен, при иммунизации индуцирует выработку только типоспецифических AT, выявляемых в РН и РИГА.

Указанные АГ различаются не только по АГ специфичности, но и по локализации в вирионе. АГ А связан с гексонами, В — с пентонами и С — с филаментозными структурами вирусного капсида. В культуре клеток, инфицированной онкогенными АВ, выявляется Т (трансплантационный) АГ.

Вирусы 1-й подгруппы содержат в гексоне родоспецифическую детерминанту ал fa-фа, общую для АВ млекопитающих, а у АВ 2-й подгруппы такой детерминанты ранее не обнаруживали.

Штаммы АВ КРС подтипов 1, 2 и 3 имеют общий КС АГ.

Экспериментальная инфекция. Воспроизводится только на телятах 15—30-дневного возраста. У больных животных развиваются пневмоэнтериты при явлениях общей слабости, летальность может достигать 60 %. У животных старшего возраста болезнь протекает хронически. Изоляты, выделенные от больных телят, поражают рес-пираторно-кишечный тракт. При сравнительном изучении серотипов 1, 2 и 3 АВ доказано, что наиболее патогенен для телят тип 3. Культивирование. Культуры клеток — единственная биологическая система для репродукции АВ КРС. Наиболее чувствительны ПЭК, ТБ. Реже используют ЛЭК и ПТ. На основании различий в культуральных свойствах отдельных серотипов КРС и характера вызываемых ими цитоморфологических изменений их делят на 2 подгруппы. 1-я подгруппа включает штаммы, относящиеся к серотипам 1, 2 и 3, которые размножаются на ПЭК, ЛЭК и ТБ, а иногда на гетерологических культурах почки других животных. Представители этой подгруппы обычно индуцируют одно ядерное включение неправильной формы. В процессе размножения их развиваются характерные ЦПИ, время наступления которых зависит от вида клеток, штамма вируса и его заражающей дозы.

Вторая подгруппа включает штаммы, относящиеся к серотипам 4, 5 и 6, а также шт. Нагано, Fukuroi и Bil. Эти штаммы хорошо репродуцируются в культуре клеток ЛЭК, медленно — в культуре клеток ТБ (ЦПИ проявляются лишь на 5—7-е сутки после заражения) и совсем не размножаются в культуре клеток ПЭК. Представители этой подгруппы продуцируют множественные внутриядерные включения правильной округлой формы.

В последние годы предложена новая биологическая система для культивирования АВ КРС — перевиваемая линия клеток почки теленка (Т1). Установлено, что из перевиваемых клеток только клетки Т1 оказались чувствительны к АВ как 1-й, так и 2-й подгрупп. Бычьи шт. АВ в культуре клеток под агаровым покрытием при температуре 37 °С через 5—7 дней образуют бляшки диаметром не более 0,5 мм; при введении в агаровое покрытие MgC12 происходит стимуляция образования бляшек.

ГА И Онкогенные свойства. ГА-активность штаммов АВ КРС неодинакова. Она зависит от вида и концентрации эритроцитов, температуры и рН среды. Шт. WBR-50 и Bovine-10 (серотип1) АГ эритроциты белых крыс в титрах 1:32 — 1:256, но не АГ эритроциты белых мышей. Шт. Bovine-19 (серотип 2) АГ эритроциты белых крыс и эритроциты мышей в титре 1:2. Более четкие результаты ГА отмечены при температуре 4 °С и использовании 1,5 %-ной взвеси эритроцитов. Штаммы серотипов 3,4 и 5, ранее считавшиеся негемагглютинирующими, после концентрации приобретают Это Свойство в отношении эритроцитов белых крыс. Шт. 671130 (серотип 6) — негемагглютинирующий. АВ КРС обычно не АГ эритроциты морских свинок, кур, овец и человека, однако японские шт. Нагано и Fukuroi АГ эритроциты белых крыс, мышей, овец, коз, морских свинок, коров и хомячков при 4 “С и не реагируют с эритроцитами обезьян, лошадей, кур и гусей. Шт. WBR-1 не агглютинирует эритроциты ни одного из указанных видов животных. Спектр ГА активности многих штаммов АВ КРС, выделенных в различных странах мира, еще не изучен. ГАд свойства не установлены.

При введении грызунам АВ вызывают развитие опухолей, но из опухолей, в которых обнаруживаются вирусные АГ, выделить вирус не удавалось. АВ человека, разделенные по биологическим подгруппам, обладают разной онкогенной способностью. Онкогенные свойства обнаружены и у некоторых штаммов бычьих АВ (у шт. WBR-1 Для новорожденных хомячков). Опухоли, индуцируемые у хомячков бычьим АВ типа 3, по онкологическим характеристикам были сходны со спонтанными новообразованиями: имели низкую степень дифференцировки, высокую скорость клеточного роста, пониженную адгезивность и высокую туморогенность. Бычий АВ типа 3 — единственный ДНК-содержащий вирус КРС, индуцирующий злокачественные неоплазии у лабораторных животных.

Интерфероногенные свойства у АВ КРС Не изучены. Однако все 12 испытанных серотипов АВ человека индуцируют образование интерферона в культуре фибробластов КЭ. Основной источник АВИ — больные животные, выделяющие вирус во внешнюю среду, главным образом с истечением из носа и фекалиями. Наблюдается латентное вирусоносительство, о чем свидетельствуют факты выделения вируса из ткани почек, тестикул и крови клинически здоровых животных. Заражаются животные воздушно-капельным и алиментарным путями, а также через конъюнктиву. Передача инфекции возможна через корма, подстилку, навоз, загрязненные выделениями больных животных.

Иммунитет и специфическая профилактика. Достижения в иммунопрофилактике АВИ более скромные, чем при других вирусных болезнях. Это, очевидно, связано с множеством типов возбудителя и латентным течением самой инфекции у взрослых животных. Поиск специфических средств защиты животных от АВИ ведется в двух направлениях: создание пассивной защиты с помощью иммунных сывороток и применение живых или инактивированных вакцин. Так, применение 2- и 3-валентных специфических сывороток снижало заболеваемость в 4—5 раз. Однако имеются сообщения о том, что пассивная иммунизация гипериммунными сыворотками в практическом отношении нецелесообразна и как средство массовой профилактики тяжела. Помимо того, пассивная защита ненадежна, поскольку животные с пассивными AT могут быть инфицированы патогенными вирусами.

В РФ и странах СНГ применяются инактивированные вакцины из штаммов двух серологических групп АВ, а также бивалентная вакцина, содержащая АВ КРС (двух групп) и возбудитель пастереллеза КРС. В качестве инактиванта используют димерэ-тиленимин (ДЭИ) и адъювант аэросил. Двукратная прививка моновакциной коров на 7—8-м месяце стельности стимулирует к моменту отела образование ВНА в крови и молозиве в высоком титре — 9,5 и 10,0 log2 соответственно. Вакцина зарекомендовала себя устойчивым в хранении и надежным иммуногенным препаратом. Новорожденные телята приобретали устойчивость к АВИ через молозиво иммунных матерей, срок персистенции колостральных AT у телят составлял 73—78 дней. Колостральные AT ингибировали активную реакцию организма телят на первую вакцинацию в период с 10—15 до 31—36 дней, однако после повторной вакцинации через 14 дней титр гуморальных AT возрастал (до 6,33—6,65 log2 в РН, 7,6—7,75 log2 в РНГА). AT, имевшиеся в крови перед вакцинацией, не влияли на интенсивность вторичного иммунного ответа. Результаты исследований показали, что первая прививка телят вакциной на фоне колострального иммунитета ведет к некоторому снижению уровня гуморальных AT, однако повторное введение препарата стимулирует повышение их титра. Поствакцинальные AT у вакцинированных телят сохраняются на высоком уровне (4,75-5,69 log2 в РН; 6,0-8,25 log2 в РНГА) до 122-127 дней (срок наблюдения), в то время как пассивные — до 73—78 дней.

Через 2 недели после вакцинации у коров отмечали повышение титров AT в РН до 4,3 log2, в РНГА до 6,4 log2. Двукратная вакцинация животных на 7—8 месяце стельности вызывала ко дню отела образование высокого титра AT, который в РН составлял 9,55 log2 и в РНГА —11,9 log2. В молозиве он соответственно был равен 10,7 и 12,3 log2-После приема молозива от вакцинированных коров AT у телят обнаруживали в высоком титре, причем на 3-й сутки жизни после приема молозива они достигали максимального значения — 5,25 log2 в РН и 7,35 log2 в РНГА. Через 21 день после прививки неиммунных телят титр AT у них был равен 2,73-4,28 log2 в РН; 4,3-5,7 log2 в РНГА. Уровень AT у телят, вакцинированных в возрасте 45—50 дней, был на 1 — 1,5 log2 выше по сравнению с телятами, привитыми в возрасте 10—15 дней. ВНА у вакцинированных телят обнаруживали с 5—7-го дня, а в РНГА с 3-го дня. Что касается длительности циркуляции поствакцинальных AT, то они у стельных коров, привитых инактивированной вакциной, за 1—2 месяца до отела выявлялись в высоком титре (7,6—8 Iog2 в РН и 8,95—9 log2 в РНГА) и сохранялись в течение 6 месяцев после отела (срок наблюдения). Уровень AT в молозиве вакцинированных коров снижался довольно быстро. Так, вдень отела титр их в молозиве составлял 10,08 и 12,3 log2 соответственно, но через двое суток он снизился в 2 раза и спустя 7 дней был равен в РН 2,18—2,33 log2 и в РНГА 4,55—4,65 log2. Однако снижение уровня колостральных AT происходило постепенно и зависело от первоначального титра. Пассивные AT у телят выявляли до 78-дневного возраста в РН в титре до 2,5 log2, в РНГА до 5 log2, а в 127-дневного возрасте их выявляли только в РНГА в титре 4 log2. При двукратной вакцинации телят инактивированным препаратом максимальный титр AT на 14-й день достигал в РН 8,4—9,3 log2 и в РНГА 9,5—10,4 log2 и сохранялся на высоком уровне 2 недели с тенденцией к снижению. Через 6 недель он составлял 7,4 и 8 log2 соответственно, а через 13 недель снизился на 2—3 log2.

Аденовирусная инфекция телят и крс

АДЕНОВИРУСНАЯ БРОНХОПНЕВМОНИЯ ТЕЛЯТ BRONCHOPNEUMONIA ADENOVIROSA VITULORUM

(Аденовирусная пневмония телят, аденовирусный пневмоэнте-рит телят.)

Аденовирусная инфекция рогатого скота характеризуется острым течением, поражением органов дыхания и пищеварения, а иногда конъюнктивитами. Болеют главным образом телята. Крупный рогатый скот часто является носителем латентных аденовирусов, вызывающих бессимптомные инфекции, патогенез и роль которых в общей патологии животных остаются неясными.

География болезни. Впервые аденовирусная инфекция крупного рогатого скота была установлена Клейном и другими в 1959 г. в США. В последующие годы болезнь регистрировали в Венгрии (Барта, Алдаси, 1964), Англии (Дарбишер, 1965), Голландии (Рондвиз, 1958), Японии (Инаба и др., 1968) и других странах.

В СССР аденовирусная бронхопневмония телят диагностирована в Азербайджане (Алиева и др., 1967) и в хозяйствах Московской области (Гуненков и др., 1970).

Возбудители – аденовирусы крупного рогатого скота, которые делятся по антигенной структуре на несколько иммунологически отличных серотипов.

Штаммы 1, 2 и 3-го серотипов имеют общий комплементсвязы-вающий антиген, отличный от комплементсвязывающего антигена вирусов 4, 5 и 6-го серотипов. На основании этих свойств бычьи аденовирусы делятся на две антигенные подгруппы.

По антигенной структуре и биологическим свойствам вирусы первой подгруппы стоят ближе к аденовирусам человека, а вирусы второй подгруппы – к аденовирусам птиц.

Группу бычьих аденовирусов дополняют антигенно отличные штаммы Nagano, Fukuroi, Bil, выделенные в Японии в 1967- 1968 гг., и штамм София-4 67, выделенный в Болгарии в 1970 г.

Вирион аденовируса имеет диаметр 70-85 ммк, состоит из ДНК и белкового капсида, сформированного из 252 призматических морфологических единиц – капсомеров. Капсид вируса построен по типу икосаэдра с кубической симметрией. Он не имеет внешней оболочки.

Для размножения аденовирусы крупного рогатого скота культивируются в культуре клеток. Наиболее чувствительны культуры клеток почек и тестикулов телят. Штаммы второй подгруппы размножаются только в культуре тестикулярных клеток телят. Размножение вирусов в клетках тканевых культур сопровождается Цитопатическим эффектом и микроскопическими изменениями – образованием внутриядерных базофильных одиночных или множественных включений.

Куриные эмбрионы и лабораторные животные не чувствительны к аденовирусам крупного рогатого скота, кроме отдельных штаммов 3-го серотипа, которые вызывают опухоли при экспериментальном заражении новорожденных хомячков.

Аденовирусы крупного рогатого скота 1-го и 2-го серотипов агглютинируют эритроциты белых крыс, а вирусы второго серотипа – эритроциты белых мышей.

Устойчивость. Аденовирусы крупного рогатого скота обладают высокой устойчивостью к физико-химическим воздействиям. Они устойчивы к эфиру, дезоксихолату натрия, сапонину, трипсину и 50%-ному этиловому спирту. Абсолютный этиловый спирт и формалин в конечной концентрации 0,1-0,3% инактивируют вирус. Показано, что обработка хлороформом повышала инфекционный титр вируса на 0,5 lg. Вирусы первой подгруппы инактивируются при температуре 56° в течение 30 минут, а второй – в течение 60 минут. Температура 41° не убивает вирус в течение семи дней. Вирусы устойчивы к изменению рН среды от 3,0 до 9,0 в течение трех часов при комнатной температуре. Они хорошо выдерживают трехкратное замораживание и оттаивание без снижения активности.

Эпизоотология болезни. В естественных условиях к вирусу более восприимчивы телята от 2-недельного до 4-месячного возраста. Более взрослые животные заболевают реже. Лабораторные животные (кролики, морские свинки, крысы, мыши) устойчивы к экспериментальному заражению.

Основным источником аденовирусной инфекции служат больные животные, выделяющие вирус во внешнюю среду, главным образом с истечением из носовой полости, с фекалиями. Наблюдается широкое вирусоносительство, о чем свидетельствуют факты выделения вируса из ткани почек, тестикулов и крови клинически здоровых животных.

Факторами передачи инфекции могут служить корма, подстилка, навоз, загрязненные выделениями больных животных.

Инфекция чаще проявляется энзоотически, поражая отдельные группы животных, быстро распространяясь на все стадо. В откормочных хозяйствах болезнь возникает при концентрации животных, завезенных из различных хозяйств. Вспышки аденовирусной инфекции отмечаются чаще в холодное время года.

Патогенез. Вирусы проникают в организм через верхние дыхательные пути и конъюнктиву воздушно-капельным путем. Возможен и алиментарный путь заражения. Вирус внедряется в клетки слизистых оболочек, размножается и накапливается в них, вызывая воспалительный процесс. Затем вирус проникает в кровь и разносится с ней в различные органы животных, вызывая бронхопневмонию, энтериты и конъюнктивиты.

Выделение аденовирусов из тестикулов телят не исключает возможности этиологической роли их в возникновении половой неполноценности бычков.

Установлено, что некоторые типы аденовирусов крупного рогатого скота обладают онкогенными свойствами, вследствие чего можно предполагать, что эти агенты могут играть какую-то роль в этиологии опухолей у крупного рогатого скота (Darbishire, 1966; Gilden, 1967; Ronduis, 1970).

Симптоматика. Болезнь характеризуется преимущественным поражением органов дыхания и пищеварения (пневмонии и энтериты или пневмоэптериты) и реже глаз. Чаще болеют телята в возрасте от двух недель до четырех месяцев. Инкубационный период 4-7 дней.

Клинически болезнь проявляется повышением температуры тела до 41,5°, слезотечением, серозным истечением из носа, кашлем, затрудненным дыханием и поносом. В период острого течения болезни снижается аппетит, а некоторые животные полностью отказываются от корма. Течение болезни зависит от условий содержания, кормления и возраста телят. Среди телят раннего возраста смертность достигает 60%. У некоторых животных болезнь принимает хроническое течение. Такие телята отстают в росте и весе.

Патологоанатомические изменения. Японские ученые Фужива-ра и Конно (Fujiwara, Konno, 1968) описали патологоанатомические изменения при аденовирусной инфекции телят, вызванной штаммом Fukuroi в естественных условиях. Они отмечали острый геморрагический катаральный гастроэнтерит, расстройство циркуляции крови во всем теле животного и образование внутриядерных включений в эндотелиальных клетках тонких сосудов. Включения также обнаруживались в клетках лимфатических узлов, почек, печени, селезенки, сердца, слизистой оболочки желудка и кишечника. В легких отмечали уплотнение и эмфизему.

Диагноз. Диагностировать аденовирусную болезнь крупного рогатого скота довольно трудно, так как некоторые симптомы этой болезни напоминают клинические признаки, наблюдаемые при других болезнях респираторного и желудочно-кишечного трактов (ринотрахеит, парагрипп-3, вирусная диарея и др.). Поэтому диагностика должна основываться прежде всего на результатах вирусологических и серологических исследований с учетом эпизоото-логических данных, клинической картины болезни и патологоанато-мических изменений.

Лабораторная диагностика основана на выделении вируса на культурах клеток и идентификации его РСК, РДП с последующим установлением типа вируса в РН. Кроме того, диагноз может быть поставлен по выявлению вирусного антигена в клетках отделяемого носоглотки при помощи меченых антител и по нарастанию специфических антител в крови переболевших животных.

Для вирусологического и серологического исследования в лабораторию посылают смывы со слизистой оболочки носовой полости больных животных или кусочки тканей трахеи, бронхов, легких и бронхиальных лимфатических узлов а также парные пробы сывороток, взятые в начале заболевания и через 3-4 недели после начала его (В. В. Гуненков, Иса Мубарак, К. К. Вертинская, 1972).

Аденовирусы крупного рогатого скота удается выделить из смывов со сли-j зистой оболочки верхних дыхательных путей, конъюнктивы, из фекалий, а также из тканей легкого, трахеи, бронхов, почки, печени, селезенки и фарингиальных лимфатических узлов, полученных при вскрытии павших телят. Вирусы также выделяют из тестикулярной и почечной ткани клинически здоровых животных (Ronduis, 1968). Для выделения вирусов однослойные культуры клеток заражают суспензией смывов, органов и фекалий.

Все штаммы аденовирусов были изолированы заражением первично трипсини-зированных культур клеток почки эмбриона и взрослого крупного рогатого скота, а также первично трипсинизированных тестикулярных клеток телят. Лучшей поддерживающей средой при выделении вирусов является 0,5%-ный гидролизат лактальбумина на растворе Хенкса или Эрла без добавления сыворотки крупного рогатого скота или с добавлением сыворотки лошади. Зараженные культуры клеток инкубируют при температуре 35-37°. При появлении выраженных цито-патических изменений после первичного заражения или в последующих пассажах клетки разрушают трехкратным последующим замораживанием и оттаиванием для освобождения от них вируса.

Специфическая дегенерация клеток, зараженных аденовирусами, начинается с периферии монослоя клеток. Монослой разрывается, клетки разбухают, утрачивают правильную форму, затем округляются и собираются в конгломераты, похожие на гроздья винограда. Цитопатический эффект сопровождается образованием внутриядерных включений и чаще всего не приводит к полному разрыву клеток, который характерен для ряда других вирусов.

Идентификацию выделенного вируса проводят при помощи РСК и РДП, в которых обнаруживают группоспецифический, растворимый А-ан-тиген. Ввиду того что вирусы первой и второй подгрупп отличаются по антигенной структуре, в реакциях используют специфические сыворотки обеих подгрупп. После установления принадлежности выделенного штамма к группе аденовирусов следует типировать штамм в реакции нейтрализации на культуре клеток. Для этого используют специфические иммунные сыворотки морских свинок и кроликов.

При серодиагностике исследуют парные пробы сывороток телят, взятых в начале заболевания (не позже 5 дней после начала болезни) и через 3-4 недели. Сыворотки исследуют в реакциях РСК, РДП, РН и РТГА с эталонными штаммами аденовируса. Вируснейтрализующие и антигемагглютинирующие антитела накапливаются в крови животных через 10-14 дней после начала заболевания. Комплементсвязывающие и преципитирующие антитела появляются в крови животных только через 3-4 недели после начала заболевания. Нарастание титров вируснейтрализующих и антигемагглютинирующих антител в 4 раза и более в парных пробах сывороток считается диагностическим.

В целях ранней диагностики болезни можно использовать метод риноцитоскопии и иммунофлуоресценции. В эпителиальных клетках слизистой оболочки носовой полости, трахеи, бронхов и альвеол, окрашенных мечеными антителами, обнаруживается специфическая флуоресценция, свидетельствующая о накоплении вирусного антигена.

Дифференциальный диагноз. При постановке диагноза на аденовирусную болезнь необходимо исключить другие вирусные болезни, и прежде всего парагрипп, инфекционный ринотрахеит, вирусную диарею, орнитоз.

Парагрипп протекает остро, инкубационный период короткий – 24-30 часов. Чаще заболевает молодняк в возрасте от одного до шести месяц и. Вирус парагриппа-3 выделяют на культуре ткани, где он вызывает гемадсорбцию и гемагглютинацию эритроцитов морской свинки. Вирус разрушается эфиром. Для его идентификации применяют реакцию задержки гемадсорбции и задержки гемагглютинации.

Инфекционным ринотрахеитом болеет крупный рогатый скот всех возрастов. Вирус чувствителен к эфиру и хлороформу и не вызывает гемагглютинацию. Его идентификацию проводят в РН.

Вирусная диарея встречается у телят в возрасте от четырех месяцев до двух лет. Заболевание характеризуется появлением на ноздрях, губах, слизистой оболочке ротовой полости и языке язвенных и некротических поражений.

Орнитоз – контагиозная болезнь, встречающаяся у телят в основном в возрасте от трех недель до 3-4 месяцев и сопровождающаяся поражением органов дыхания. Экспериментально удается вызвать респираторное заболевание и гибель морских свинок и кроликов при заражении интраперитонеально и в носовую полость. Идентификацию возбудителя проводят в РСК.

Лечение. Специфических методов лечения нет, медикаментозное неэффективно.

Иммунитет. У переболевших телят в крови обнаруживают антитела, которые сохраняются до 2-3 месяцев. Экспериментальное заражение в этот период безрезультатно. У новорожденных телят в крови могут быть обнаружены антитела, которые передаются от иммунной матери с молозивом.

Профилактика и меры борьбы. В целях профилактики аденовирусной болезни некоторые зарубежные исследователи испытали экспериментальные живые и инактивированные вакцины. Bartha в 1967 г. испытал живую вакцину, приготовленную из штамма ТНТ 62 4-го серотипа, прошедшего 72 пассажа на культуре тестикулярных клеток телят. Для приготовления инактивированной вакцины автор применил 3%-ный раствор формалина. 4-й серотип вируса для получения вакцин взят потому, что он является основным возбудителем аденовирусной инфекции в Венгрии.

Трайб (Tribe) в 1969 г. предложил инактивированную комбинированную вакцину из аденовируса 3-го серотипа и вируса парагриппа 3-го серотипа крупного рогатого скота.

По мнению Моханти (Mohanty, 1968), при приготовлении вакцин против аденовирусной болезни целесообразнее использовать очищенные капсидные антигены, свободные от нуклеиновых кислот, чтобы избежать онкогенности их. По мнению того же автора, иммунизация более эффективна при создании локального иммунитета путем вакцинации животных в носовую полость.

При профилактике и борьбе с аденовирусной болезнью необходимо строго выполнять комплекс общих ветеринарно-санитарных мероприятий.

Чтобы предотвратить занос инфекции в хозяйство, нужно каран-тинировать всех поступающих телят. Не ввозить в хозяйство, ферму животных из хозяйств, неблагополучных по респираторным болезням телят. При появлении в хозяйстве болезни необходимо организовать мероприятия, не допускающие ее распространения. Для этого устраняют причины, способствующие распространению болезни (скученность, сырость, сквозняки) и возможно быстрее выявляют всех больных и подозрительных по заболеванию животных. Последних изолируют. Клетки, где были телята, дезинфицируют 20%-ной взвесью свежегашеной извести или 2%-ным раствором едкого натра. Персонал, обслуживающий больных животных, не должен входить в помещения, в которых размещаются здоровые животные.

Указатель литературы

Алиева Н. А., Дрейзин Р. С, Г а н и е в М. К., Кафаров М. Ш, Алиева Р. А., С а р ы е в Г. А. Выделение аденовирусов у телят, больных бронхопневмонией. – Ветеринария , 1967, № 7.

Гуненков В. В., Мубарак Ис а, Вертинская К. К, Сюрин В. Н. К этиологии заболеваний органов дыхания у телят. – Ветеринария , 1972, Л° 4, с. 34-36.

_{Мубарак Иса, Вертинская К. К., Гуненков В. В. Лабораторная диагностика аденовирусной инфекции телят. – Ветеринария , 1972, № 5, с. 106-108.}

Darbishire G. Н. Oncogenicity of bovine adenovirus type 3 in hamsters.- Nature, 1966, v. 211, p. 102.

FuiwareH., ConnoS. Histopathology of an ensootic diarrhaeal disease in cattle. -Nat. Inst. Anim. Hlth. Qrt., 1968, v. 8, p. 16-25.

Bovine adenovirus type 3 detection of specific tumour and T-antigens. By R. V. Q i 1 d e n, G.Kern, T. G. В e d d о v, R. G. H u 1 b n e r. Virology, 1967, v. 31, p. 727-729.

_{M о h a n t у S. B. Comments on bovine adenoviruses. – J. Amer. vet. med. Assoc., 1968, v. 152, p. 792-794.}

_{A combined bovine parainfluenza and adenovirus vaccine. By G. W. Tribe, A. D. Kanarek, J. B. Kerry, G. W h i t e. Vet. Rec, 1969, v. 84, p. 299-303.}

Здоровая Ферма

Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота

Темой этой статьи является незаслуженно забытая как с точки зрения диагностики, так и профилактических мероприятий аденовирусная инфекция крупного рогатого скота.

1. Представители аденовирусной инфекции крупного рогатого скота
2. Исследование аденовирусной инфекции КРС
3. Профилактика аденовирусной инфекции КРС

Представители аденовирусной инфекции крупного рогатого скота

Одним из представителей семейства Adenoviridae поражающим клетки млекопитающих в современной классификации является род Mastadenovinis.

Для крупного рогатого скота актуальными являются типы А, В, С аденовирусной инфекции:

• Bovine adenovirus A (Bovine adenovirus 1. 2) BAdV-1, BAdV-2;
• Bovine adenovirus В (Bovine adenovirus 3) BAdV-3;
• Bovine adenovirus C (Bovine adenovirus 10)BAdV-10.

Всего представителей рода Mastadenovirus насчитывается 6 видов (А – F), среди которых существуют 52 серотипа.

Вирус обладает тропизмом в основном к эпителиальным клеткам бронхолегочной системы, слизистой носа, глаз, желудочно-кишечного тракта. Особое значение имеет тропизм аденовируса к лимфоидной ткани.

В связи с этими особенностями и формируется весь комплекс возможных клинических проявлений аденовирусной инфекции КРС:

• лихорадка,
• катаральное воспаление слизистой оболочки дыхательных путей,
• глаз,
• кишечника,
• воспаление лимфоидной ткани и регионарных лимфоидных узлов.

В лимфоидной ткани вирус способен формировать перерождение в опухоль, чаще доброкачественную, но не исключен и злокачественный путь.

В настоящее время нет данных, подтверждающих факт передачи вируса от животных к человеку. Известно, что в респираторной патологии человека аденовирус (так называемая OPBИ) играет доминирующее значение, по некоторым данным до 35-40 %, тогда как вирус гриппа только 23-28%.

Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота способена вызывать латентную (бессимптомную) или хроническую инфекцию с длительным персистированием в лимфоидной ткани. Иммунитет обусловлен появлением вирус-нейтрализующих антител и клетками иммунной памяти, которые строго специфичны тому или иному типу вируса.

Исследование аденовирусной инфекции КРС

В диагностической ветеринарной лаборатории в период с 2014 по 2015гг. было исследовано 138 проб сывороток крови крупного рогатого скота различных технологических групп из 9 хозяйств молочного направления. Данные исследований представлены в таблице.

В процентном выражении из всех исследованных проб сывороток крови отрицательными оказались 29,7%, положительно реагирующими с оценкой реакции в:

1 титр балл 18,1%;
2 титр балла 20,2%;
3 титр балла 18,2%;
4 титр балла 6,5%;
5 титр баллон 7,2%.

Полученные данные свидетельствуют о спонтанном распространении аденовирусной инфекции крупного рогатого скота молочно-товарных ферм и комплексов, так как любой образец, давший в результате проведенного исследования от 1 до 5 титр баллов, считается положительным, и ввиду отсутствия вакцинации можно сделать вывод о контакте с вирусом и развитии инфекционного процесса.

На гистограмме (см. рис. 1) представлено распределение количества положительно реагирующих животных в иммуноферментном анализе (далее ИФА) к общему количеству исследованных животных.

Проведенные автором исследования указывают на значительное распространение в Республике Беларусь аденовирусной инфекции крупного рогатого: серопозитивными являются 70,2% исследованных животных.

Для определения эпизоотического процесса аденовирусной инфекции было отобрано 120 проб сывороток крови крупного рогатого скота от различных технологических групп животных одного молочно-товарного комплекса.

Где ОП оптическая плотность;
S/P соотношение (образец/положительный контроль);

Полученные данные позволяют построить линейную зависимость уровня антител в сывороток крови животных от аденовирусной инфекции (BAdV), а также предположить сроки инфекции и реинфекции в стадах на комплексах закрытого типа.

Данные представлены на гистограмме.

Согласно исследованиям автором установлена циркуляция вируса аденовирусной инфекции крупного рогатого скота. Это указывает на необходимость проводить профилактические мероприятия.

Профилактика аденовирусной инфекции крупного рогатого скота

В качестве основного профилактического средства рекомендуется применение вакцин с включением их в программу вакцинации. Существуют разработанные вакцинные препараты с включением в их состав штамма вируса BAdV-З. Этот тип вируса по антигенной структуре в значительной степени схож с человеческим типом вируса 5-го серотипа HAdV-5. С 2006 г. существуют разработки вакцин против аденовируса крупного рогатого скота на основе векторных технологий, тем не менее, до настоящего времени нет доказанного успеха практического их применения.

Ввиду того, что на данный момент в мире нет эффективных разработанных вакцин общего применения, по мнению автора, необходимо проводить генетические исследования в каждом отдельном хозяйстве закрытого типа с целью определения типа циркулирующего аденовируса, его изолирования и изготовления адресной инактивированной аутовакцины.

Организация Здоровая Ферма консультирует и обучает ветеринаров в области животноводства сельского хозяйства по всей Беларуси. А также, мы помогаем хозяйствам значительно улучшить показатели продуктивности в области животноводства. Звоните нам или оставляйте свои данные на нашем сайте.

Источник – журнал “Ветеринарное дело”

Культивирование аденовирусов крупного рогатого скота в перевиваемой культуре клеток Текст научной статьи по специальности « Ветеринарные науки»

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Нургазиев Рысбек Зарылдыкович, Толубаева Майрамкул Толубаевна

Аденовирусная инфекция телят (англ. Bovine adenovirae infection) остропротекающая болезнь, преимущественно телят. Характеризуется поражением органов дыхания, пищеварения и конъюнктивитами. У взрослых животных протекает обычно латентно. Возбудителем аденовирусной инфекции является ДНК-геномный вирус , принадлежащий к семейству Adenoviridae, роду Mastadenovirus. Культура клеток единственная биологическая система для репродукции аденовирусов крупного рогатого скота (АВ КРС). Проведена серодиагностика по респираторным инфекциям крупного рогатого скота . Приведены результаты иммуноферментного анализа парных сывороток крови на выявление специфических антител к возбудителям аденовирусной инфекции , парагриппа-3, респираторно-синцитиальной инфекции, инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи. Представлены экспериментальные данные чувствительности аденовирусов на перевиваемой культуре клеток Vero . Для культивирования использовали вирусную массу, приготовленную из носовых смывов. Микроскопированием ежедневно исследовали зараженную культуру клеток и контрольную культуру. Дегенеративные изменения в клетках наблюдали на 2-е сут. после заражения. Цитопатическое действие вируса в клеточной культуре характеризовалось появлением округлых клеток и образованием участков, свободных от клеток. Клетки округлялись и собирались в конгломераты. На 7-е сут. образовались «стерильные пятна», а в контрольной культуре клеток изменения не наблюдались. Таким образом, полученные результаты в ходе исследований свидетельствуют о возможности использования перевиваемой культуры клеток Vero . Также с помощью серологических исследований выявлено наличие антител к респираторным вирусам крупного рогатого скота , что подтверждает циркуляцию этих вирусов среди поголовья КРС в животноводческих хозяйствах. Результаты исследований свидетельствуют о циркуляции смешанной инфекции, среди которых преобладают аденовирус и вирус парагриппа-3.

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Нургазиев Рысбек Зарылдыкович, Толубаева Майрамкул Толубаевна

BOVINE ADENOVIRUS CULTIVATION IN A CONTINUOUS CELL CULTURE

Bovine adenovirus (BAV) infection is an acute disease in calves mostly. The disease affects the respiratory and digestive systems, and causes conjunctivitis. Adult animals usually have a latent form. The causative agent is a DNA genome virus belonging to the Adenoviridae family, the Mastadenovirus genus. Cell culture is the only biological system to reproduce BAV. Serodiagnosis of respiratory infections in cattle was conducted. The results of ELISA paired sera tests to detect specific antibodies to the pathogens of adenovirus infection, parainfluenza-3, respiratory syncitial infection, infectious rhinotracheitis and viral diarrhea are presented. The experimental data of adenovirus sensitivity in the passaged culture of Vero cells are discussed. The virus mass prepared from nasal washings was used for the cultivation . The infected and control cell culture were daily checked with microscope. Degenerative changes in the cells were revealed on the 2nd day after infection. The cytopathic effect of the virus in the cell culture was characterized by the appearance of rounded cells and the formation of the areas free of cells. Plaques formed on the 7th day; there were no changes in the control cell culture . The obtained results prove the possibility of using a continuous culture of Vero cells. The serological tests have revealed the presence of antibodies to the respiratory viruses in cattle ; that confirms the circulation of these viruses in the cattle herds on farms. The research results indicate the circulation of mixed infections which are dominated by adenovirus and parainfluenza-3 virus .

Текст научной работы на тему «Культивирование аденовирусов крупного рогатого скота в перевиваемой культуре клеток»

Р.З. Нургазиев, М.Т. Толубаева R.Z. Nurgaziyev, M.T. Tolubayeva

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ АДЕНОВИРУСОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В ПЕРЕВИВАЕМОЙ КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК

BOVINE ADENOVIRUS CULTIVATION IN A CONTINUOUS CELL CULTURE

Ключевые слов: аденовирусная инфекция, крупный рогатый скот, телята, культура клеток, Vero, вирус, ЦПД, изолят, питательная среда, культивирование.

Аденовирусная инфекция телят (англ. — Bovine adenovirae infection) — остропротекающая болезнь, преимущественно телят. Характеризуется поражением органов дыхания, пищеварения и конъюнктивитами. У взрослых животных протекает обычно латентно. Возбудителем аденовирусной инфекции является ДНК-геномный вирус, принадлежащий к семейству Adenoviridae, роду Mastadenovirus. Культура клеток — единственная биологическая система для репродукции аденовирусов крупного рогатого скота (АВ КРС). Проведена серодиагностика по респираторным инфекциям крупного рогатого скота. Приведены результаты иммуноферментного анализа парных сывороток крови на выявление специфических антител к возбудителям аденовирусной инфекции, парагриппа-3, респираторно-синцитиальной инфекции, инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи. Представлены экспериментальные данные чувствительности аденовирусов на перевиваемой культуре клеток Vero. Для культивирования использовали вирусную массу, приготовленную из носовых смывов. Микроскопированием ежедневно исследовали зараженную культуру клеток и контрольную культуру. Дегенеративные изменения в клетках наблюдали на 2-е сут. после заражения. Цитопатическое действие вируса в клеточной культуре характеризовалось появлением округлых клеток и образованием участков, свободных от клеток. Клетки округлялись и собирались в конгломераты. На 7-е сут. образовались «стерильные пятна», а в контрольной культуре клеток изменения не наблюдались. Таким образом, полученные результаты в ходе исследований свидетельствуют о возможности использования перевиваемой культуры клеток Vero. Также с помощью серологических исследований выявлено наличие антител к респираторным вирусам круп-

ного рогатого скота, что подтверждает циркуляцию этих вирусов среди поголовья КРС в животноводческих хозяйствах. Результаты исследований свидетельствуют о циркуляции смешанной инфекции, среди которых преобладают аденовирус и вирус парагриппа-3.

Key words: adenoviral infection, cattle, calves, cell culture, Vero, virus, cytopathic effect (CPE), isolate, culture medium, cultivation.

Bovine adenovirus (BAV) infection is an acute disease in calves mostly. The disease affects the respiratory and digestive systems, and causes conjunctivitis. Adult animals usually have a latent form. The causative agent is a DNA genome virus belonging to the Adenoviridae family, the Mastadenovirus genus. Cell culture is the only biological system to reproduce BAV. Serodiagnosis of respiratory infections in cattle was conducted. The results of ELISA paired sera tests to detect specific antibodies to the pathogens of adenovirus infection, parainfluenza-3, respiratory syncitial infection, infectious rhinotracheitis and viral diarrhea are presented. The experimental data of adenovirus sensitivity in the passaged culture of Vero cells are discussed. The virus mass prepared from nasal washings was used for the cultivation. The infected and control cell culture were daily checked with microscope. Degenerative changes in the cells were revealed on the 2nd day after infection. The cytopathic effect of the virus in the cell culture was characterized by the appearance of rounded cells and the formation of the areas free of cells. Plaques formed on the 7th day; there were no changes in the control cell culture. The obtained results prove the possibility of using a continuous culture of Vero cells. The serological tests have revealed the presence of antibodies to the respiratory viruses in cattle; that confirms the circulation of these viruses in the cattle herds on farms. The research results indicate the circulation of mixed infections which are dominated by adenovirus and parainfluenza-3 virus.

Нургазиев Рысбек Зарылдыкович, д.в.н., проф., член-корр. НАН КР, ректор, Кыргызский национальный аграрный университет им. К.И. Скрябина, г. Бишкек, Кыргызская Республика. E-mail: rysbekn@mail.ru. Толубаева Майрамкул Толубаевна, соискатель, м.н.с., лаб. вирусологии и биотехнологии, Кыргызский научно-исследовательский ветеринарный институт им. А. Дуйшеева, Кыргызский национальный аграрный университет им. К.И. Скрябина, г. Бишкек, Кыргызская Республика. E-mail: tolubaeva.m@gmail.com.

Nurgaziyev Rysbek Zaryldykovich, Dr. Vet. Sci., Prof., Corresponding Member of Natl. Acad. of Sci. of Kyrgyz Republic, Rector, Kyrgyz National Agricultural University named after K.I. Skryabin, Bishkek, Kyrgyz Republic. E-mail: rysbekn@mail.ru. Tolubayeva Mayramkul Tolubayevna, Degree Applicant, Staff Scientist, Kyrgyz Research Institute of Veterinary Medicine named after A. Duysheyev, Kyrgyz National Agricultural University named after K.I. Skryabin, Bishkek, Kyrgyz Republic. E-mail: tolu-baeva.m@gmail.com

Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота (аденовирусная пневмония телят, аденовирусный пневмоэнтерит телят) — остро протекающее заболевание молодняка сельскохозяйственных животных с поражением органов дыхания, пищеварения, лимфоидной ткани, конъюнктивитами [1]. Инфицированные телята отстают в росте, плохо наращивают мышечную массу [2].

Вирус относится к семейству Adenoviridae, роду Mastadenovirus. Вирионы вируса представляют собой двадцатигранник кубической симметрии, лишенный суперкапсидной оболочки диаметром 70-90 нм. Каждый вирион состоит из 252 капсомеров, из которых 240 являются гексонами (капсомер в окружении шести капсомеров), 12 — пентонами (капсо-мер в окружении пяти капсомеров) и длинного отростка с утолщением на вершине. Геном аденовирусов содержит одну линейную молекулу двуспиральной ДНК [3, 4].

Выделение аденовируса у телят проводят в культуре клеток [5]. Для культивирования аденовируса крупного рогатого скота успешно используются различные методы культивирования: как первичные и перевиваемые линии клеток различных животных и человека, так и тканевые культуры. Так, из первичных клеток аденовирусы культивируются на эпителиальных клетках почки теленка, тести-кул бычка, овцы, легких эмбрионов коровы, обезьяны, кошки, морской свинки, куриных фибробластах, клетках амниона человека и др., из перевиваемых — на культуре клеток почек теленка — МДБК, ПТ-80, тестикул бычка — ТБ, почки эмбрионов овцы, хомячка, диплоидных клетках фибробластов человека и т.д. Но на культуре клеток злокачественной опухоли человека Hela аденовирусы крупного рогатого скота не размножаются. Это является их отличительным признаком от аденовирусов человека [6].

Длительность культивирования инфицированных клеток 10-12 дн. Размножение аденовирусов в культуре клеток сопровождается медленным развитием ЦПД. В процессе ЦПД аденовирусов в клеточном монослое отмечают округление клеток, повышение их све-топреломляемости, образование внутриядерных включений. Затем клетки постепенно

группируются в конгломераты в виде гроздьев винограда. За счет некротизации клеток в монослое образуются «стерильные пятна». ЦПД никогда не приводит к полному разрушению клеток. Окрашивание инфицированного монослоя позволяет выявить в клетках ба-зофильные внутриядерные включения. При отсутствии ЦПД на протяжение 4 дней делают 2-3 слепых пассажа с интервалом 3-4 дн. На третьем пассаже срок наблюдения удлиняют на 10-15 дн. [7].

Увеличение продукции вируса представляет собой большой практический интерес, особенно при массовом производстве вирусных препаратов. Изучению влияния различных факторов на репродукцию вирусов и накопление вирусных антигенов в культуре клеток посвящены многие исследования. Оказалось, что это зависит от ряда условий, оптимизация которых имеет важное технологическое значение. Успех культивирования вирусов прежде всего зависит от удачного выбора клеточного субстрата [8].

Цель исследования — провести мониторинг распространения респираторных инфекций, выявить и изучить рост полевых изолятов аденовируса КРС на перевиваемой культуре клеток Vero, время проявления ЦПД и установить титр вируса.

Материалы и методы

Работа выполнялась в лаборатории вирусологии и биотехнологии Кыргызского научно-исследовательского института ветеринарии им. А. Дуйшеева.

Материал для исследований отбирали у телят с клиническими признаками респираторных инфекций. Патологическим материалом служили сыворотка крови и носовые смывы. Собранный материал исследовали с помощью иммуноферментного анализа. Пробы, давшие положительный результат, культивировали на культуре клеток. В качестве системы для культивирования использовали перевиваемую линию культуру клеток Vero — почки зеленой мартышки. Клетки Vero отмывали от сыворотки. Культуру клеток инфицировали вируссодержащим испытуемым материалом в дозе 200 мкл. Для контакта вируса с клетками вируссодержащую массу инкубировали в термостате при температуре

37°С. Далее удаляли посевной материал и вносили поддерживающую среду. Зараженную и контрольные культуры инкубировали в термостате при 37°С. Культуры исследовали ежедневно в течение 11 дней.

Результаты исследований и обсуждение

С помощью иммуноферментного анализа в патологическом материале были выявлены специфические антитела к возбудителям аденовирусной инфекции, парагриппа-3, респи-раторно-синцитиальной инфекции, инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи. Исследовали парные сыворотки крови у невак-цинированных животных на вышеуказанные инфекции. Результаты исследований показали, что в настоящее время респираторные заболевания крупного рогатого скота имеют широкое распространение. Этиология массовых респираторных болезней телят является многофакторной. Из данных таблицы следует, что респираторные инфекции в некоторых случаях встречаются в ассоциации. Результаты исследований сыворотки крови крупного рогатого скота свидетельствуют о преобладании аденовирусной инфекции и па-рагриппа-3.

С учетом того, что респираторные болезни среди телят имеют полиэтиологичный характер, при проведении профилактических мероприятий необходимо учесть этот фактор. В нашем случае можно было использовать двухвалентную вакцину, против адено- и парагриппа-3.

Для последующего культивирования ви-руссодержащего материала была отобрана проба, давшая положительный результат на аденовирусную инфекцию. Использовали культуру клеток Vero. Перевиваемую культуру клеток Vero выращивали в питательной

среде с добавлением 5% фетальной сыворотки и антибиотика в пластиковых матрасах (75 см2). Оценку качества клеток и плотности монослоя определяли микроскопированием.

Суспензию готовили из биоматериала носовых смывов. Культуру исследовали ежедневно. При микроскопировании зараженных культур различные дегенеративные изменения в клетках наблюдали на 2-е сут. после заражения. Цитопатическое действие (ЦПД) вируса в клеточной культуре характеризовалось появлением округлых клеток и образованием участков свободных от клеток.

Уже на вторые сутки наблюдали ЦПД на 30% поверхности посевного материала. Клетки начали округляться и собираться в конгломераты. Образование «стерильных пятен» наблюдали на 7-е сут. и ЦПД 60%.

На 10-е сут. площадь «стерильных пятен» увеличилась, образованные конгломераты были в виде гроздьев винограда.

На 11-е сут. были четко видны конгломераты. Площадь ЦПД составила 80% поверхности культуры. На 11-е сут. зараженную культуру клеток консервировали и в дальнейшем использовали для ПЦР.

Монослой перевиваемых клеток наступал на 5-6-е сут. Перевиваемые линии клеток Vero оказались чувствительными. Цитопати-ческие изменения наблюдались в виде собрания пораженных клеток и конгломератов, напоминающих «гроздья винограда» и последующее отторжение их от стекла. Vero было более чувствительной, вирус размножился характерным изменением клеток. Полевые изоляты с 1 пассажа вызывали характерные для аденовирусов внутриклеточные изменения в культуре клеток. Выделенные изоляты хорошо репродуцировались в клетке Vero, и титр достигал до 4,5 1од ТЦД 50/мл.

Результаты исследования патологического материала (сыворотка крови) от телят методом иммуноферментного анализа

№ Идентификационный номер/возраст Инфекционный ринотрахеит Вирусная диарея Вирусная респираторно-сицитиальная инфекция Пара-грипп-3 Аденовирусная инфекция

Как правильно пересадить адениум в домашних условиях

Пересадка адениума — важная тема для каждого садовода. Эта процедура имеет большое значение в выращивании необыкновенных, пустынных представителей флоры. Следует понимать, что для пересадки существует несколько причин. По своей природе адениумы развиваются очень медленно, но в идеальных условиях могут и порадовать довольно быстрым ростом, и ранним цветением.

1. Родина цветка и его внешний вид
2. Причины пересадки
3. Пересадка при покупке
4. Заболевание корней и каудекса
5. Грунт с неправильным составом
6. Большой горшок
7. Маленький горшок
8. Техника пересадки
9. Выбор горшка
10. Выбор и состав почвы

Родина цветка и его внешний вид

Адениум — кустарниковое или древесное суккулентное растение из семейства Кутровых. Считается, что родом он из Саудовской Аравии и произрастает в основном в пустыне.

Ствол растения мясистый, утолщенный к основанию (каудекс) и сильноветвистый. Листья зеленые, гладкие, блестящие и вытянутые. Основную массу кроны составляют неимоверной красоты цветы. Огромные с разнообразной расцветкой: розовые, красно – черные, белые и желтые. Тургор тоже может отличаться: простой и махровый.

Причины пересадки

Для пересадки есть много поводов и причин. Следует выделить самые важные.

Пересадка при покупке

После того, как куплен выбранный экземпляр и принесен домой, есть необходимость пересадить растение. Все из-за того, что в цветочных магазинах почва в посадочных и транспортировочных горшках в основном стандартная для всех цветов. А адениум требует особую почвенную смесь.

Заболевание корней и каудекса

Загнивание каудекса и корня может иметь три причины: механическое повреждение и образование раны и попадание влаги в нее, обильный полив и переохлаждение. Можно попытаться спасти растение. Достать его из горшка, стряхнуть лишний грунт и аккуратно острым, предварительно продезинфицированным, лезвием срезать места поражения.

Присыпать обильно антисептиком или фунгицидом и дать ему хорошенько просохнуть. После этого растение пересаживают в новую землю и ждут. Если все верно сделано, то цветок оживет.

Грунт с неправильным составом

Часто случается так, что цветы отдают или дарят новым хозяевам, и они уже находятся в неправильном грунте. Для адениумов нужен особый состав почвы, и они требовательны к этому. Если растение попало к вам в период покоя, то лучшим решением будет отложить процедуру до момента наступления вегетационного периода.

Когда цветок находится в покое, то полив практически не проводится и смесь не навредит ему. Но если растение задыхается и чахнет на глазах, стоит немедленно провести замену почвенной смеси.

Большой горшок

Часто неопытные цветоводы сажают адениум в слишком большой или глубокий горшок. В такой ситуации требуется замена горшка на более подходящий. Следует помнить правило по поводу периода покоя растения. Нужно быть осторожным с поливом. Большой горшок забирает много воды, а это может привести к гибели корня и всего цветка.

Маленький горшок

Взрослые экземпляры сами покажут, что горшок им мал. Есть такая особенность – пе-ресаживать их стоит только тогда, когда вазон лопнет от давления корней. Дело в том, что мощную корневую систему адениума не может удержать ни горшок, ни грунт.

Молодые растения стоит пересаживать примерно раз в 2-3 года. Для них этого будет достаточно. А вот малыши – сеянцы нуждаются в пересадке уже через три – четыре месяца с начала жизни.

Важное правило для всех адениумов – не сажать в горшок «на вырост».

Техника пересадки

Пересадка адениума в домашних условиях начинается в конце зимы и в начале весны. Момент переселения в новый горшок затягивать не стоит. Растению нужно успеть за-полнить своим корневищем всю площадь горшка до наступления периода покоя. Если этого не случится, то это приведет к загниванию корня и каудекса.

Пересаживая молодые и более зрелые растения, грунт в котором они находились, можно не удалять полностью. Хотя правильный субстрат и сам осыплется, как только достать адениум из горшка.

Чтобы не повредить мясистый корень неаккуратными движениями, можно просто про-мыть их струей воды. Если повреждения произошли, то стоит обработать рану специальным препаратом или присыпать древесным углем и оставить подсыхать. Когда корни и рана про-сохнут, только тогда стоит продолжать процедуру пересадки.

У молодых адениумов корни растут как бы вширь, приобретают мясистость и становятся толще. Если есть желание иметь растение с причудливым корнем, который располагается над землей, то при каждой пересадке стоит приподнимать его над уровнем грунта на 1-3 см.

Через некоторое время получится прекрасное и завораживающее деревце в технике бонсай. Остальные корешки нужно равномерно распределить по поверхности грунта и досыпать нужное количество. Обрезка корня не требуется, если нет повреждений. Если проводится пересадка сеянцев, то грунт рекомендуют не удалять совсем, а воспользоваться методом перевалки. Это не даст повредить нежные корни маленьких растений.

За два дня перед началом планируемой пересадки следует пролить земляной ком и дать цветку отстояться несколько дней для просыхания почвы. Это делается для того, чтобы каудекс успел напитать в себя воду, тогда растение легче перенесет пересадку. Когда корень отмыт от старого субстрата, цветок оставляют, чтобы корни подсохли. Иначе это тоже может дать гнилостные образования уже в новом горшке.

Смесь для посадки должна быть определенной влажности. Для адениума важно чтобы она была не слишком сухой и не слишком мокрой. Это важно. Проверить это можно простым способом. В ладошку нужно взять горсть земли и сжать. При разжатии на руке должен образоваться ком и если его потрогать пальцем, то он легко развалится. Это и есть оптимальная влажность. Если ком разваливается без нажатия, то почва суховата, а если при нажатии в нем образуется углубление, то почва слишком мокрая.

После того как проведена пересадка растения, поливать сразу его не нужно. Опрыскивать тоже строго не рекомендуется. Особенно если есть повреждения на каудексе. Это губительно для него и потерять растение можно очень легко.

Взрослые экземпляры стоит поливать только спустя неделю после переселения, вода при этом подается строго маленькими дозами. Со временем количество жидкости можно увеличить. Полив молодых саженцев начинают на 3-4-тый день после переселения. Сеянцы нуждаются в поливе уже на 2-ой день пересадки, но стоит ориентироваться по состоянию цветка.

Выбор горшка

Форма и материал вазона — это важный фактор в содержании адениума. Первый год маленькое растение имеет длинный корень и ему нужно поместиться в емкости. Для них в основном выбирают глубокую посуду или даже стаканы.

Для молодых растений можно использовать стандартные горшки, так как корни у них толстые и растут вширь.

Если есть желание создать бонсайную форму цветка, то лучше вы-брать вазон в виде плошки. Еще одно требование к вазону – много больших дренажных отверстий для быстрого выведения лишней влаги.

Размер емкостей для адениума измеряется расстоянием от каудекса до стенки и составляет:

• взрослое растение — 7-8 см;
• подростки — 3-4 см;
• сеянцы — 2-3 см.

Из какого сырья сделан вазон тоже играет немаловажную роль при выборе. К примеру, горшок, сделанный из пластика, плохо проводит холод и тепло и в такой емкости растение не пострадает от перепада температуры. Но если пластик коричневого цвета или темно–зеленого, то стоит избегать размещения на южных окнах.

Удобен материал и тем, что корни растения не присасываются к стенкам и извлекать цветок при пересадке намного легче. Соли и вещества, которые скапливаются в верхней части вазона при поливе, легко отмываются водой. Стоимость такого горшка будет не высокой.

Глиняные горшки не покрытые глазурью конечно лучше смотрятся в композиции с адениумом, но имеют свои особенности. Конечно, такой материал хорошо пропускает влагу и воздух, уменьшая риск залить растение. Вес горшка делает его устойчивым и можно не бояться, что растение перевернется под весом кроны.

Но со временем воздухо и водопрницаемость снижается и выделяемые соли оседают на всех стенках горшка, портя внешний вид. Если цветок находится на северных или южных окнах, то такой вазон может принести вред. Глина сама по себе есть проводником холода и тепла.

Выбирая емкость для адениума, планируя пересадку, определиться нужно сразу. Вы-бор зависит от самого цветовода – что ему больше нравится или что подходит к интерьеру квартиры. Глиняная емкость или пластмассовая — нужно учитывать освещение и режим полива.

Выбор и состав почвы

Просто взять смесь из магазина и посадить в нее адениум не получится. Для них нужны особые смеси, составленные собственноручно в четких пропорциях. Рецептов существует много, но важно знать и помнить: субстрат для посадки должен быть рыхлым, воздухопроникаемым, влагопроникаемым и вследствие этого должен быстро просыхать.

Такие свойства смеси могут дать рыхлители, которые обязательны в использовании.

Материалы, которые нужно применять в составе следующие:

• гранулированная глина – 20%;
• уголь древесный – 10-15%;
• песок крупнозернистый, преимущественно речной – 20%;
• крошка пенопластовая – 25%;
• крошка мелкая кирпичная – 20%;
• крошка керамзитовая – 25%;
• керамзит средний и мелкий – 10-20%;
• крупный вермикулит – 20%;
• перлит – 50%.

При составлении смеси нужно учесть, а из какого материала будет горшок. Если используется вазон из не обливной глины, то содержание вермикулита в рекомендованной пропорции будет идеально. Когда берется емкость из пластика или из глазированной глины, значит, вермикулит практически не добавляется. Такие горшки и так хорошо задерживают влагу. Это касается и температурного режима.

Чем прохладнее климат, тем хуже просыхает почва, а значит, не стоит увлекаться рыхлителями, которые накапливают влагу. В жарких и сухих условиях наоборот использование влаговпитывающих составляющих просто необходимо. Стоит также позаботиться о дезинфекции посадочного субстрата.

Для адениума нужен хороший дренажный слой в несколько сантиметров. Для этого можно использовать пенопласт, кирпичную крошку и керамзит. Древесный уголь рекомендован только для сеянцев адениума, но ни в коем случае для взрослых и подросших растений. Холодная галька в качестве основы для дренажа не допустима. Ее употребление вызывает гниение корневища и каудекса в том числе.

Адениум будет радовать цветоводов, которые способны уделить немного времени своему любимцу и знают все о пересадке.